All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix(with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒，包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs，Oligo(dT)20VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可开始反应。

产品简介

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix(with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒，包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs，Oligo(dT)20VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的cDNA，下游可用于qPCR、普通PCR等实验。RNA中存在基因组DNA污染，如果反转录前不做去除处理，下游进行qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染，区别于常规的DNase I，dsDNase能够特异性的消化双链DNA（dsDNA以及DNA与RNA的杂合链），并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase I去除基因组DNA污染的方法相比，dsDNase无需额外加入EDTA进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix(with dsDNase)作为升级后的一链cDNA合成试剂盒，15分钟内最长可获得12 kb cDNA。可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组DNA污染与反转录分开进行的操作方法，或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。

使用方法

针对基因组含量高RNA样品

1.基因组DNA污染去除

① 于冰上配制如下反应体系：

a.推荐采用试剂盒提取的RNA作为模板。

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染；

注：若RNA中基因组DNA污染严重，可适当延长37℃温育时间至5 min。

④ 65℃温育2 min，使dsDNase失活，冰上放置。

2.第一链cDNA合成

① 于冰上配制如下反应体系：

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 50℃温育15 min；

注：若目标RNA不含Poly(A)结构，可预先25℃温育10min。

④ 反应结束后，85℃温育5 min，以终止反应；

⑤ 将获得的cDNA溶液置于冰上，用于后续实验。

注：cDNA溶液置于-20℃储存，建议不超过1周；置于-80℃可长期储存。

针对基因组含量低RNA样品

① 于冰上配制如下反应体系：

a.推荐使用试剂盒提取的高质量RNA作为模板。

② 轻柔吸打混匀，瞬离；

③ 37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染；

④ 55℃温育15 min；

⑤ 反应结束后，85℃温育5 min以终止反应；

⑥ 迅速将获得的cDNA置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。

注意事项

预混液中已经包含Oligo(dT)20VN和随机引物，不仅适用于包含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。