MI Lipo2000转染试剂是基于脂质体颗粒技术的转染试剂，能够与DNA或RNA形成复合物，并将复合物运送到各种各样的贴壁细胞和悬浮细胞中。
产品及特点
MI Lipo2000转染试剂是基于脂质体颗粒技术的转染试剂，能够与DNA或RNA形成复合物，并将复合物运送到各种各样的贴壁细胞和悬浮细胞中。经过无数次试验验证，MI Lipo2000的转染效率与Lipofectamine®2000相媲美，并且在有血清存在的条件下，也可以实现对真核细胞的DNA或RNA的转染实验。本产品具有以下特点：
1.高转染效率，适用于多种细胞种类。
2.无需去除细胞培养基中的血清。
3.转染后，无需换液。
4.对细胞作用温和，毒性很低。
成分规格
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产品组成 |
MI20003 |
MI20008 |
MI20015 |
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MILipo2000转染试剂 |
0.3 mL |
0.75 mL |
1.5 mL |
保存条件
存储条件：4℃储存（切勿冷冻），有效期2年。
使用方法
DNA转染
以下指导实验步骤为利用24孔板在哺乳动物细胞中转染DNA。其他转染需求，请参考扩大或缩小转染规模操作步骤。每种反应混合物体积为单个孔的体积，且考虑移液误差。对于大多数细胞系，使用1:2至1:3的DNA(μg)与MILipo2000转染试剂(μl)比例制备复合物。高细胞密度转染细胞，以获得高效率、高表达水平，并最大限度地减少细胞毒性。可能需要进行优化（请参阅DNA转染优化方案）。
1.贴壁细胞:转染前一天，接种0.5-2×105细胞，培养基体积500μl，不加抗生素，使转染时细胞汇合度达到70-90%。
悬浮细胞:在转染之前，准备复合物，接种4-8×105细胞，培养基体积为500μl，不加抗生素。
2.每次转染前，请按照以下步骤制备转染复合物：
a)在50μl Opti-MEM®培养基（可替换为其他无血清培养基）中稀释DNA，轻轻混匀。
b)轻轻晃动混匀MaxFect Lipo2000转染试剂，在50μl Opti-MEM®培养基（可替换为其他无血清培养基）中加入适量MaxFect Lipo2000转染试剂，充分混匀稀释。在室温下孵育5分钟。注意：在25分钟内继续执行步骤c。
c)将步骤a和b制得的液体按照1:1的比例混合即得到转染复合物，总体积为100μl，轻轻混匀，室温下孵育20分钟（溶液可能出现混浊）。注意：复合物在室温下可稳定6小时。
3.取上述转染复合物100μl加入含有细胞的培养基中，来回晃动24孔板轻轻混匀。
4.将细胞置于CO2培养箱中37°C孵育18-48小时即可分析转染细胞。转染完4-6小时后可更换培养基。
5.对于稳定的细胞系：转染后24小时将细胞以1:10（或更高的稀释度）传代到新的生长培养基中。第二天可更换选择性培养基（如果需要）。
DNA转染优化方案
为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳效果，可以对DNA和转染试剂的比例及转染初始细胞密度进行优化。比如要确保细胞在转染时汇合度大于90%，DNA(μg):MILipo2000转染试剂(μl)的比值在1:0.5到1:5范围内。
RNA转染
以下指导实验步骤为利用24孔板在哺乳动物细胞中转染RNA。其他转染需求，请参考扩大或缩小转染规模操作步骤。每种反应混合物体积为单个孔的体积，且考虑移液误差。以此操作步骤为参考，可能需要进行优化（请参阅RNA转染优化方案）。
1.转染前一天，接种细胞于500μl不含抗生素的培养基中，使转染时细胞汇合度达到30-50%。注意：以较低密度转染细胞可以延长转染和检测时间之间的间隔，并最大限度地减少因细胞过度生长而导致的细胞活力下降。
2.每次转染前，请按照以下步骤制备转染复合物：
a)在50μl Opti-MEM®培养基（可替换为其他无血清培养基）中稀释20pmol Stealth™RNAi或siRNA寡聚体（添加到细胞中时RNA的最终浓度为33 nM），轻轻混匀。
b)轻轻晃动混匀MILipo2000转染试剂，在50μl Opti-MEM®培养基（可替换为其他无血清培养基）中加入1μl MILipo2000转染试剂，充分混匀稀释。在室温下孵育5分钟。注意：在25分钟内继续执行步骤c。
c)将步骤a和b制得的液体按照1:1的比例混合即得到转染复合物，总体积为100μl，轻轻混匀，室温下孵育20分钟（溶液可能出现混浊）。
3.取上述转染复合物100μl加入含有细胞的培养基中，来回晃动24孔板轻轻混匀。
4.将细胞置于CO2培养箱中37°C孵育24-96小时即可做后续基因敲除等实验。转染完4-6小时后可更换培养基。
RNA转染优化方案
为达到高转染效率和低非特异性的最佳效果，可以对RNA和转染试剂的浓度。比如RNA浓度在10-50pmol范围内，MILipo2000转染试剂体积在0.5-1.5μl范围内。根据目标基因的性质，在优化条件时也可以使用更高的密度转染细胞。
扩大或减小转染规模
使用下表扩大或减少转染实验的体积，规格系数如下表所示。对于自动化的高通量系统，建议在96孔板中转染50µl复合物（可通过将细胞直接加入到转染复合物中来进行快速96孔板转染。在板中制备复合物，并在100µl复合物中直接加入两倍上述方案中细胞密度的细胞。在复合物存在的情况下，细胞仍可粘附。）
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培养容器 |
培养表面积 (cm2) |
培养基体积 |
稀释培养基体积 |
DNA 转染 |
RNA 转染 |
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DNA |
MILipo2000转染试剂 |
RNA |
MILipo2000转染试剂 |
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96孔 |
0.3 |
100 µl |
2 × 25 µl |
0.2 µg |
0.5 µl |
5 pmol |
0.25 µl |
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24孔 |
2 |
500 µl |
2 × 50 µl |
0.8 µg |
2.0 µl |
20 pmol |
1.0 µl |
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12孔 |
4 |
1 ml |
2 × 100 µl |
1.6 µg |
4.0 µl |
40 pmol |
2.0 µl |
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6孔 |
10 |
2 ml |
2 × 250 µl |
4.0 µg |
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